服務(wù)介紹：

免疫熒光三標(biāo)即利用酪胺信號(hào)放大（TSA，Tyramide signal amplification）即TSA技術(shù)，在同一張切片上對(duì)三種蛋白同時(shí)進(jìn)行標(biāo)記，從而可實(shí)現(xiàn)對(duì)多種蛋白空間定位，定性及半定量分析。

TSA技術(shù)主要原理為熒光標(biāo)記的酪胺在二抗上偶聯(lián)的HRP與H₂O₂的作用下變?yōu)榛罨睦野凡⒏街诎袠?biāo)周圍的蛋白酪氨酸殘基上，此結(jié)合是共價(jià)結(jié)合。而一抗與靶標(biāo)、二抗與一抗之間是非共價(jià)結(jié)合。通過抗體洗脫液處理，非共價(jià)結(jié)合的一抗二抗被洗脫掉，而共價(jià)結(jié)合的熒光酪胺依然附著在靶標(biāo)周圍，將靶標(biāo)通過熒光標(biāo)記顯示出來。在檢測第二個(gè)靶標(biāo)時(shí)，相當(dāng)于全新的一輪標(biāo)記，無需考慮第二輪的抗體是否與第一輪的抗體產(chǎn)生交叉反應(yīng)。只需改變不同種類熒光染料標(biāo)記TSA即可實(shí)現(xiàn)多個(gè)靶標(biāo)的標(biāo)記。通過多次重復(fù)免疫標(biāo)記，使用不同的熒光酪胺實(shí)現(xiàn)雙重或多重熒光染色。

主要用途：

免疫熒光染色及成像分析是研究組織形態(tài)和組織原位抗原表達(dá)不可或缺的檢測技術(shù)，廣泛應(yīng)用于臨床病理和醫(yī)學(xué)及生物學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域。凡是可以作為抗原或半抗原的物質(zhì)，如：蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、酶、激素、病原體及受體等，都可以在細(xì)胞、亞細(xì)胞水平檢測到。

檢測原理：

免疫熒光技術(shù)根據(jù)抗原抗體特異性結(jié)合的原理，先將已知抗體（或抗原）標(biāo)記上熒光基團(tuán)，再利用這種熒光抗體（或抗原）作為探針來檢測固定細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。在熒光顯微鏡下觀察，當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光照射后，會(huì)發(fā)射出一定波長的熒光，從而確定靶抗原（或抗體）的性質(zhì)與定位，還可利用定量技術(shù)（如：流式細(xì)胞儀）測定含量。

實(shí)驗(yàn)流程：

脫蠟與水化-抗原修復(fù)-血清封閉-孵育一抗-孵育二抗-DAPI染核-封片-顯微鏡鏡檢。

樣本要求及運(yùn)輸條件：

1、提供固定合格的樣本。組織離體后，選擇合適的固定液立即固定，固定液的量建議大于組織體積的10-15倍，新鮮標(biāo)本用合適的容器固定24-48h，大標(biāo)本固定12h，再切開固定。標(biāo)本常溫（24℃左右）或冷藏（4℃）固定，切勿冷凍結(jié)冰，固定樣本常溫運(yùn)輸送樣。

2、涂片和爬片必須充分固定，石蠟切片實(shí)驗(yàn)前需充分脫蠟。

3、提供準(zhǔn)確的抗體信息。

注意事項(xiàng)：

1、客戶提供的抗體，要求先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，除了正式實(shí)驗(yàn)樣本外，需客戶提供預(yù)實(shí)驗(yàn)樣本（預(yù)期高表達(dá)，蠟塊和切片皆可）和陽性對(duì)照（若不能提供，可以協(xié)商由我司提供）。

2、抗體：一般指一抗（客戶檢測目的蛋白），需要客戶提供準(zhǔn)確的抗體名稱、品牌貨號(hào)，根據(jù)抗體貨號(hào)可以確認(rèn)抗體的應(yīng)用（檢測種屬和檢測方式）是否符合基本要求，否則存在風(fēng)險(xiǎn)，具體以預(yù)實(shí)驗(yàn)為準(zhǔn)。接收抗體時(shí)，需確認(rèn)抗體體積與保存溫度，建議至少10μl，多余可返還。二抗由我司提供，若客戶提供特殊來源的一抗（如：綿羊來源），需客戶提供相應(yīng)二抗。

3、預(yù)實(shí)驗(yàn)，通常采用3+1+1模式，即三個(gè)濃度梯度，一張陽性對(duì)照，一張空白對(duì)照。預(yù)實(shí)驗(yàn)確認(rèn)效果后，再做正式實(shí)驗(yàn)，預(yù)實(shí)驗(yàn)我司可提供免費(fèi)掃描并放置于服務(wù)器（可用網(wǎng)頁直接瀏覽）。預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果優(yōu)先由客戶自行確認(rèn)，并選擇正式實(shí)驗(yàn)濃度，我司可協(xié)助推薦，但不對(duì)最終結(jié)果作保證，預(yù)實(shí)驗(yàn)和正式實(shí)驗(yàn)間隔周期不要太久，建議連續(xù)三周內(nèi)完成。

4、同一個(gè)抗體用于不同種屬、不同臟器，濃度都需做預(yù)實(shí)驗(yàn)確認(rèn)（可以減少濃度梯度）。

5、正式實(shí)驗(yàn)的趨勢我司不做保證。