服務(wù)介紹：

免疫熒光技術(shù)（immunofluorescence technique）是在免疫學(xué)、生物化學(xué)與顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項(xiàng)技術(shù)。用熒光抗體示蹤或檢查相應(yīng)抗原的方法稱為熒光抗體法；用已知的熒光抗原標(biāo)記物示蹤或檢查相應(yīng)抗體的方法，稱為熒光抗原法。這兩種方法總稱為免疫熒光技術(shù)。但實(shí)際工作中熒光抗原技術(shù)應(yīng)用很少，所以常將熒光抗體技術(shù)稱為免疫熒光技術(shù)。

在一張切片上對(duì)兩個(gè)抗原進(jìn)行標(biāo)記，即為免疫熒光IF雙標(biāo)，可直接在組織切片、細(xì)胞涂片或培養(yǎng)細(xì)胞爬片上原位顯示某些蛋白質(zhì)或多肽類物質(zhì)，普通方法免疫熒光雙標(biāo)要求一抗來源不能相同，若是相同，二抗無法區(qū)分。不同的一抗對(duì)應(yīng)標(biāo)記不同顏色，可以用于定位兩種不同的抗原。

結(jié)果展示：

主要用途：

免疫熒光染色及成像分析是研究組織形態(tài)和組織原位抗原表達(dá)不可或缺的檢測(cè)技術(shù)，廣泛應(yīng)用于臨床病理和醫(yī)學(xué)及生物學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域。凡是可以作為抗原或半抗原的物質(zhì)，如：蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、酶、激素、病原體及受體等，都可以在細(xì)胞、亞細(xì)胞水平檢測(cè)到。

檢測(cè)原理：

免疫熒光技術(shù)根據(jù)抗原抗體特異性結(jié)合的原理，先將已知抗體（或抗原）標(biāo)記上熒光基團(tuán)，再利用這種熒光抗體（或抗原）作為探針來檢測(cè)固定細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。在熒光顯微鏡下觀察，當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光照射后，會(huì)發(fā)射出一定波長的熒光，從而確定靶抗原（或抗體）的性質(zhì)與定位，還可利用定量技術(shù)（如：流式細(xì)胞儀）測(cè)定含量。

實(shí)驗(yàn)流程：

脫蠟與水化-抗原修復(fù)-血清封閉-孵育一抗-孵育二抗-DAPI染核-封片-顯微鏡鏡檢。

樣本要求及運(yùn)輸條件：

1、提供固定合格的樣本。組織離體后，選擇合適的固定液立即固定，固定液的量建議大于組織體積的10-15倍，新鮮標(biāo)本用合適的容器固定24-48h，大標(biāo)本固定12h，再切開固定。標(biāo)本常溫（24℃左右）或冷藏（4℃）固定，切勿冷凍結(jié)冰，固定樣本常溫運(yùn)輸送樣。

2、涂片和爬片必須充分固定，石蠟切片實(shí)驗(yàn)前需充分脫蠟。

3、提供準(zhǔn)確的抗體信息。

注意事項(xiàng)：

1、客戶提供的抗體，要求先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，除了正式實(shí)驗(yàn)樣本外，需客戶提供預(yù)實(shí)驗(yàn)樣本（預(yù)期高表達(dá)，蠟塊和切片皆可）和陽性對(duì)照（若不能提供，可以協(xié)商由我司提供）。

2、抗體：一般指一抗（客戶檢測(cè)目的蛋白），需要客戶提供準(zhǔn)確的抗體名稱、品牌貨號(hào)，根據(jù)抗體貨號(hào)可以確認(rèn)抗體的應(yīng)用（檢測(cè)種屬和檢測(cè)方式）是否符合基本要求，否則存在風(fēng)險(xiǎn)，具體以預(yù)實(shí)驗(yàn)為準(zhǔn)。接收抗體時(shí)，需確認(rèn)抗體體積與保存溫度，建議至少10μl，多余可返還。二抗由我司提供，若客戶提供特殊來源的一抗（如：綿羊來源），需客戶提供相應(yīng)二抗。

3、預(yù)實(shí)驗(yàn)，通常采用3+1+1模式，即三個(gè)濃度梯度，一張陽性對(duì)照，一張空白對(duì)照。預(yù)實(shí)驗(yàn)確認(rèn)效果后，再做正式實(shí)驗(yàn)，預(yù)實(shí)驗(yàn)我司可提供免費(fèi)掃描并放置于服務(wù)器（可用網(wǎng)頁直接瀏覽）。預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果優(yōu)先由客戶自行確認(rèn)，并選擇正式實(shí)驗(yàn)濃度，我司可協(xié)助推薦，但不對(duì)最終結(jié)果作保證，預(yù)實(shí)驗(yàn)和正式實(shí)驗(yàn)間隔周期不要太久，建議連續(xù)三周內(nèi)完成。

4、同一個(gè)抗體用于不同種屬、不同臟器，濃度都需做預(yù)實(shí)驗(yàn)確認(rèn)（可以減少濃度梯度）。

5、正式實(shí)驗(yàn)的趨勢(shì)我司不做保證。