服務(wù)介紹：

免疫熒光六標(biāo)即利用酪胺信號放大（TSA，Tyramide signal amplification）即TSA技術(shù)，在同一張切片上對六種蛋白同時進行標(biāo)記，從而可實現(xiàn)對多種蛋白空間定位，定性及半定量分析。

TSA技術(shù)主要原理為熒光標(biāo)記的酪胺在二抗上偶聯(lián)的HRP與H₂O₂的作用下變?yōu)榛罨睦野凡⒏街诎袠?biāo)周圍的蛋白酪氨酸殘基上，此結(jié)合是共價結(jié)合。而一抗與靶標(biāo)、二抗與一抗之間是非共價結(jié)合。通過抗體洗脫液處理，非共價結(jié)合的一抗二抗被洗脫掉，而共價結(jié)合的熒光酪胺依然附著在靶標(biāo)周圍，將靶標(biāo)通過熒光標(biāo)記顯示出來。在檢測第二個靶標(biāo)時，相當(dāng)于全新的一輪標(biāo)記，無需考慮第二輪的抗體是否與第一輪的抗體產(chǎn)生交叉反應(yīng)。只需改變不同種類熒光染料標(biāo)記TSA即可實現(xiàn)多個靶標(biāo)的標(biāo)記。通過多次重復(fù)免疫標(biāo)記，使用不同的熒光酪胺實現(xiàn)雙重或多重熒光染色。

結(jié)果展示：

免疫熒光六標(biāo)七色

送樣運輸要求：

1、石蠟切片常溫保存運輸，冰凍切片﹣20℃保存運輸

2、細胞爬片PFA固定15min后用無菌PBS洗滌，無菌PBS浸泡，4℃冰袋保存運輸?shù)綄嶒炇?/span>

實驗大體流程：

石蠟切片脫蠟至水——微波抗原修復(fù)——畫圈雙氧水封閉——血清封閉——孵育第一種一抗

——孵育HRP二抗——孵育iF440-TSA——抗體洗脫——血清封閉——孵育第二種一抗

——孵育HRP二抗——孵育iF488-TSA——抗體洗脫——血清封閉——孵育第三種一抗

——孵育HRP二抗——孵育iF546-TSA——抗體洗脫——血清封閉——孵育第四種一抗

——孵育HRP二抗——孵育iF594-TSA——抗體洗脫——血清封閉——孵育第五種一抗

——孵育HRP二抗——孵育iF647-TSA——抗體洗脫——血清封閉——孵育第六種一抗

——孵育HRP二抗——孵育iF750-TSA——DAPI染核——自發(fā)熒光淬滅——抗熒光淬滅封片劑封片——掃描全景成像。

（TSA熒光染料的搭配及加樣順序根據(jù)各抗體的表達情況來確定。）

僅供科研用途，不可用于臨床診斷！