PI染色實驗服務(wù)

實驗介紹  

PI（碘化丙啶，Propidium Iodide）染色是一種經(jīng)典的細胞核熒光染色技術(shù)，通過特異性嵌入雙鏈DNA/RNA，實現(xiàn)對細胞核的標記。由于PI無法穿透完整細胞膜，常與膜通透性檢測聯(lián)用，廣泛應(yīng)用于：  

-細胞凋亡/壞死分析（區(qū)分死/活細胞）  

-細胞周期檢測（DNA含量定量）  

-腫瘤藥效評估（增殖抑制率計算）  

本服務(wù)采用高純度PI試劑，結(jié)合流式細胞術(shù)或熒光顯微鏡平臺，提供精準的定量與定性分析。

實驗流程  

1.樣本制備  

   - 客戶提供：細胞懸液（≥1×10? cells）或組織切片  

   - 可選處理：細胞固定/透化（乙醇或低滲緩沖液）  

2.染色操作  

   - PI工作液配制（終濃度 5–50 μg/mL，避光）  

   - 樣本與染液共孵育（15–30 min，室溫避光）  

3.核酸酶處理（可選）  

   - 加入RNase A（終濃度 100 μg/mL）消除RNA干擾  

4.檢測分析  

   -流式方案：488 nm激發(fā)，＞620 nm發(fā)射波長檢測  

   -成像方案：熒光顯微鏡下觀察紅色核熒光（Ex/Em=535/617 nm）  

注意事項  

1.樣本活性  

   - 新鮮樣本需在24 h內(nèi)處理，避免細胞自溶導致假陽性  

2.避光操作  

   - PI具光敏性，全程需在暗環(huán)境中進行  

3.對照設(shè)置  

   - 必須包含：空白對照、陽性（死細胞）對照  

4.干擾排除  

   - 避免使用含酚紅的培養(yǎng)基（背景熒光干擾）  

   - 多色實驗時需驗證光譜重疊（PI與FITC/Percp存在串擾）  

結(jié)果展示  

-流式數(shù)據(jù)：  

   細胞周期分析圖（G0/G1, S, G2/M期比例）  

   凋亡細胞定量（PI+ Annexin V- 早期凋亡；PI+ Annexin V+ 晚期凋亡/壞死）  

-成像數(shù)據(jù)：  

   熒光顯微圖像：死細胞核呈強紅色熒光，活細胞無著色  

   組織切片中壞死區(qū)域定位  

服務(wù)優(yōu)勢  

-靈敏度：可檢測＜5%的亞G1期凋亡細胞  

-穩(wěn)定性：批內(nèi)重復CV值＜5%  

-兼容性：支持多色熒光共標（如Hoechst/Annexin V聯(lián)用）