Western  Blot  樣品信息采集表

WB實驗信息送樣單.doc

★樣品備注：                                            

★剩余樣品是否需要返還：  □是  □否 保存期限：3個月

1.膠版排列形式：

上樣順序---從左到右：（請準確填寫清楚每張膜的上樣順序）

★需要多塊時請附上EXCEL表格。

10孔泳道

注：膠片條帶沒有marker,全膜帶marker有特殊要求請備注：

(1) 請在您要做的選擇上打個對號（√）（必填）

常用選擇：條帶（ ）、全膜（ ） 

注：一張全膜一個指標，內(nèi)參單獨跑一張全模，有特殊要求提前溝通

(2)請在您要做的內(nèi)參上打個對號（√）（必填）

常用內(nèi)參選擇：GAPDH（ ）、B-actin（ ） 其他：___________

2、檢測指標信息 

實驗信息已全部填寫清楚，無其他特殊要求。    客戶簽名                      

取樣人簽字:                     驗收人簽字:                         

Western  Blotting  樣品采集指南

蛋白實驗（比如 WB、IP、Co-IP 等）

貼壁細胞：所需細胞數(shù)≥ 1×10⁷

從培養(yǎng)箱中取出貼壁培養(yǎng)細胞，顯微鏡下觀察細胞，確定生長狀態(tài)良好；

第一種方法

A.棄去培養(yǎng)基，向細胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中加入 5 ml 無菌 PBS，洗一次；

B.用胰酶消化細胞，觀察細胞消化狀態(tài)，（細胞脫離培養(yǎng)板）

C.將胰酶消化液（含消化下來的細胞）轉(zhuǎn)移至1.5離心管中，1200r/min,10min低速離心，棄去胰酶消化液；（保留細胞沉淀）

D. 加入 1ml PBS ，1200r/min,10min離心沉淀細胞，棄去 PBS（一定要吸凈）；先兩次。

E.置于-80°C 或液氮中長期保存；

F.運輸方式：干冰。

第二種方法

A.棄去培養(yǎng)基，向細胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中加入 5 ml 無菌 PBS，洗一次，里面液體吸干凈；

B.把胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿用封口膜包裝完整

C.置于-80°C 或液氮中長期保存；

D. 運輸方式：干冰。

懸浮細胞：所需細胞數(shù)≥ 1×107

A.確定細胞生長狀態(tài)良好；

B.轉(zhuǎn)移至離心管中，低速離心收集得到細胞沉淀，棄去培養(yǎng)液；

C.加入 5 ml PBS ，低速離心沉淀細胞，棄去 PBS（一定要吸凈）；

D.置于-80°C 或液氮中長期保存；

E.運輸方式：干冰。

組織樣品

A.取下新鮮組織 ≥100 mg；剔除非研究所需的組織類型（比如結(jié)締組織和脂肪組織等）；

B.迅速用預(yù)冷的無菌 PBS 溶液或生理鹽水將組織表面的殘留血液沖洗干凈；

C.如果組織體積較大，應(yīng)盡量將組織切成長寬高均≤0.5cm 的小塊（即黃豆大?。?，多管保存；

D.將處理好的組織樣本保存于無菌的 1.5 ml EP 管或旋蓋凍存管中；

E.迅速置于液氮中冷凍 3-4 小時以上，然后轉(zhuǎn)移至-80°C 或液氮中長期保存。

F.運送方式：干冰運輸。

外泌體樣品

外泌體樣本需客戶自己提取，本公司不包含提取服務(wù)

A.將提取好的外泌體樣本保存于無菌的 1.5 ml EP 管或2ml研磨管中

B.提取好的外泌體，濃度1ug/ul以上，體積要求至少20ul/指標。

C.WB檢測（1-4個指標）：送樣量≥100ul

D.WB檢測（5-10個指標）：送樣量≥300ul

E.置于-80°C 保存

F.運送方式：干冰運輸

IP樣品

A.新鮮組織，100mg以上，細胞量要求1×10⁷以上，收集細胞沉淀，

A. .抗體要求為IP級別;

B. IP抗體必須由客戶提供，公司不提供抗體。

C. 置于-80°C 保存；.運送方式：干冰運輸

CO-IP樣品

A. 新鮮組織，100mg以上，細胞量要求1x10 的7次方以上，收集細胞沉淀，

B.抗體要求為IP級別; 且IP和IB的抗體不能同種屬來源：

C.COIP抗體必須由客戶提供，公司不提供抗體。

D. 需要提供兩只抗體 一只IP級用來沉淀，另一只檢測抗體IB可以做WB（如果兩支抗體雙向驗證需要兩支抗體都是IP級別）

E. 置于-80°C 保存；.運送方式：干冰運輸

植物組織樣品：所需樣本量≥100 mg

植物樣本需額外提供一抗二抗

A. 取得待測植物樣品后，用蒸餾水把泥土漂洗干凈，用濾紙把多余水分吸取干凈。

B.分裝成合適大小保存于無菌的 1.5 ml EP 管或旋蓋凍存管中；

C.然后轉(zhuǎn)移至-80°C 或者液氮中保存，在避免凍融的情況一般保存1年，建議盡快檢測。

D.運送方式：干冰運輸。

請您確認以上信息無誤，在實驗開始后如有更改概不負責，若您在實驗開始前有需要請及時與我們聯(lián)系。本公司將積極配合您對實驗的要求，本公司承諾實驗結(jié)果真實可靠，若您對實驗結(jié)果存有疑問，請在一個月內(nèi)及時回復(fù)我們。本公司還將您的實驗產(chǎn)品（標本及已提蛋白）在實驗完成后，保存三個月，在以上規(guī)定期限內(nèi)，本公司將積極配合您對實驗結(jié)果的復(fù)核,若超過以上期限，本公司將不再承擔責任和義務(wù)。

衷心感謝您對武漢皮諾飛的信任，祝您實驗順利！