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實驗技巧
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透射電鏡之自噬

自噬的概念


自噬(autophagy=self-eating)意為自體吞噬,是真核細胞在自噬相關基因(autophagy related gene,Atg)的調(diào)控下通過溶酶體機制,負責將受損的細胞器、錯誤折疊的蛋白及其他大分子物質等運送至溶酶體降解并再利用的進化保守過程。自噬可防止細胞損傷,促進細胞在營養(yǎng)缺乏的情況下存活,并對細胞毒性刺激作出反應。雖然自噬在饑餓和/或應激條件下發(fā)揮細胞保護作用,但其還可調(diào)節(jié)代謝條件,在不同程度上導致各種人類疾病。


自噬的影響因素


其影響因素包括:如饑餓、生長因子缺乏、微生物感染、細胞器損傷、蛋白質折疊錯誤或聚集、DNA損傷、放療、化療等等,均會造成細胞自噬產(chǎn)生。正常情況下,細胞自噬發(fā)生的概率很低,只有受到以上因素的影響時,自噬才會被激活,參與機體穩(wěn)態(tài)調(diào)控。


如何觀察自噬


由于自噬體屬于亞細胞結構,普通光鏡下看不到,因此,直接觀察自噬需在透射電鏡下。自噬的過程大致分為三個階段:


第 一階段(起始):自噬誘導信號被細胞接受后,類“脂質體” 碗狀結構即在胞漿某處形成小的膜結構,在 電鏡下觀察到其不斷擴張、呈非球形、扁平狀雙層膜的碗狀結構,稱為自噬前體(phagophore),主要特征是成新月狀,單層或多層膜


第二階段(延伸):不斷延伸的自噬前體,將胞漿中的若干成分(包括細胞器)收口包入,成為密閉的球狀自噬體(autophagosome),內(nèi)含胞漿成分,如線粒體、內(nèi)質網(wǎng)。


第三階段(降解):自噬體與溶酶體(lysosome)發(fā)生融合,形成自噬溶酶體(autolysosome),期間溶酶體酶降解自噬體的內(nèi)膜, 使兩者的內(nèi)容物合為一體,自噬體中的包含物被降解,將產(chǎn)物諸如氨基酸、脂肪酸之類輸送到胞漿中,重新利用供能,殘渣則被排出細胞外或滯留于胞漿。


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實驗圖例

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