**一、技術(shù)原理與科研價值**  

流式細(xì)胞術(shù)是大鼠免疫微環(huán)境解析的金標(biāo)準(zhǔn)，皮諾飛生物通過500+例實驗證實，其可同時檢測15+免疫細(xì)胞亞群，分辨率達(dá)0.2μm顆粒。相較于傳統(tǒng)ELISA，具有單細(xì)胞水平、多參數(shù)分析的核心優(yōu)勢，特別適用于：  

- 自身免疫疾病模型（如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎大鼠）  

- 腫瘤免疫治療藥效評估（PD-1/CTLA-4抑制劑）  

- 移植免疫排斥反應(yīng)監(jiān)測  

**二、皮諾飛特色檢測系統(tǒng)**  

1. **硬件配置方案**  

   - BD FACSymphony? A5（標(biāo)配5激光40檢測器）  

   - 自動化上樣系統(tǒng)（通量達(dá)384孔板）  

   - 專用大鼠抗體庫（覆蓋200+標(biāo)記物）  

2. **標(biāo)準(zhǔn)化樣本制備流程**  

**三、核心檢測指標(biāo)與抗體選擇**  

| 細(xì)胞亞群 | 關(guān)鍵標(biāo)記物組合 | 推薦熒光染料 |  

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| T細(xì)胞 | CD3+CD4+CD8+ | FITC/PE-Cy7/APC |  

| B細(xì)胞 | CD45R+CD19+ | PerCP-Cy5.5 |  

| NK細(xì)胞 | CD161a+CD3- | PE-Vio770 |  

| 單核巨噬細(xì)胞 | CD11b/c+CD68+ | APC-Vio780 |  

| 干細(xì)胞 | CD34+CD133+ | BV421 |  

**四、創(chuàng)新多色panel設(shè)計服務(wù)**  

1. **8色基礎(chǔ)方案**（適用于表型篩查）  

   CD3/CD4/CD8/CD25/CD45RA/CD11b/CD161a/DAPI  

2. **15色深度解析方案**（含功能標(biāo)記物）  

**五、關(guān)鍵質(zhì)控環(huán)節(jié)**  

1. **樣本活性保障**  

   - 離體后4h內(nèi)完成處理（推薦皮諾飛專用保存液）  

   - 活細(xì)胞率＞95%（7-AAD驗證）  

2. **補(bǔ)償校準(zhǔn)策略**  

   - 單陽對照樣本必做  

   - 每日運(yùn)行CS&T質(zhì)控 beads  

3. **數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化分析**  

     

   （展示淋巴細(xì)胞/單核細(xì)胞/粒細(xì)胞分群邏輯）  

**六、皮諾飛特色數(shù)據(jù)服務(wù)**  

1. **AI輔助分析平臺**  

   - 自動識別異常細(xì)胞群（訓(xùn)練集含10萬+大鼠數(shù)據(jù)）  

   - 一鍵生成符合GLP規(guī)范的報告  

2. **跨平臺關(guān)聯(lián)分析**  

   - 流式數(shù)據(jù)與轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果整合  

   - 免疫細(xì)胞占比與病理評分相關(guān)性建模  

3. **典型應(yīng)用案例**  

   - 案例1：糖尿病大鼠脾臟Treg細(xì)胞占比下降（p＜0.01）  

   - 案例2：黑色素瘤模型PD-L1+細(xì)胞升高2.3倍  

**七、技術(shù)問答與排錯指南**  

Q：為何CD4+細(xì)胞群出現(xiàn)雙峰？  

A：通常因非特異性結(jié)合導(dǎo)致（建議增加Fc阻斷劑孵育步驟）  

Q：如何提高稀有細(xì)胞檢出率？  

A：推薦使用皮諾飛高靈敏檢測方案（最低可測0.01%頻率）  

**八、延伸技術(shù)服務(wù)**  

- 胞內(nèi)因子檢測（IFN-γ/IL-17等）  

- 磷酸化流式（pSTAT3/pAKT信號通路）  

- 外泌體表面標(biāo)記物檢測