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神奇的外泌體電鏡,隔壁皮諾飛科研實驗室才是最佳實驗地點

外泌體是什么?

近年來,外泌體(Exosome)在科學研究中變得尤為重要。它們是細胞分泌的一種小囊泡,通常直徑在30至150納米之間。外泌體在細胞之間的通訊中起著至關重要的作用,并且已經被證明在腫瘤、免疫調節(jié)、神經退行性疾病等領域具有重要意義。由于其豐富的研究前景,科學家們對外泌體的形態(tài)、結構和功能展開了廣泛的研究,而透射電子顯微鏡(TEM)則是觀察外泌體的常用工具之一。究竟如何通過電鏡圖片來解讀外泌體呢?

外泌體的電鏡成像原理

透射電子顯微鏡是一種基于電子束透射和成像的高分辨率顯微鏡。相比于光學顯微鏡,電子顯微鏡可以提供更高的分辨率,通??梢赃_到0.1納米至0.2納米的水平,因此適用于觀察外泌體這種亞細胞結構,電子束透過樣品并形成影像。這種影像能夠清晰顯示外泌體的結構特征,例如其雙層膜和內部細微結構。

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如何準備外泌體樣品

在正式觀察電鏡圖片前,首先需要通過一系列步驟準備外泌體樣品。通常,樣品的制備流程包括:收集和純化:通常通過超速離心法從細胞培養(yǎng)基或生物體液中分離外泌體。外泌體的純度對于后續(xù)的電鏡成像至關重要。

外泌體的典型形態(tài)及識別

TEM圖片中,外泌體呈現出圓形橢圓形的結構,邊緣通常具有清晰的雙層膜。它們的直徑范圍30至150納米之間,較小的粒子往往為30-50納米,而較大的則在100納米以上。外泌體內部常見“杯狀”結構,這種形態(tài)被認為是外泌體的標志性特征,識別外泌體的重要依據。

如何解讀外泌體電鏡圖片

電鏡圖片的解讀主要基于外泌體的形態(tài)和內部結構。以下幾點有助于識別和分析外泌體:觀察外形:外泌體在電鏡圖中應呈現出完整的球形或橢圓形,邊緣清晰。如果外形不規(guī)則或者邊緣模糊,可能不是典型的外泌體。

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檢查大?。菏褂秒婄R圖片上的標尺測量外泌體的直徑。如果粒子直徑明顯超出或小于30至150納米的范圍,可能不是外泌體。
關注雙層膜結構:外泌體的雙層膜在電鏡圖片上應非常明顯。雙層膜越清晰,外泌體的質量和純度通常越高。內部特征:外泌體內部一般顯示出較少的結構,有些可能存在杯狀內凹形態(tài)。若內部結構豐富,可能是其他類型的細胞器或污染物。

外泌體電鏡圖片中的常見問題

在觀察外泌體電鏡圖片時,研究者可能會遇到一些常見的問題,比如圖像不清晰、雜質干擾等。這些問題常常影響外泌體的準確識別和分析。以下是幾個常見問題及其處理方法:圖像對比度低:對比度不足可能使得外泌體的結構細節(jié)難以分辨??梢酝ㄟ^增加重金屬染色劑的濃度或延長染色時間來提高對比度。

雜質干擾:由于樣品準備過程中可能會引入雜質,需特別注意。如果發(fā)現非球形、形態(tài)模糊且無雙層膜結構的顆粒,則可能是雜質。這種情況可以通過改善超速離心的純化步驟來減少。過度聚集:外泌體常常傾向于聚集在一起,影響個體結構的觀察。為了防止這種情況,可以適當稀釋樣品,并在涂樣時盡量將外泌體分散。大小不一:盡管外泌體的大小范圍較大,但相同樣品中的外泌體通常會有相對一致的尺寸。如果尺寸差異過大,可能存在其他細胞外囊泡(如微囊泡或凋亡小體)的混雜。

如何優(yōu)化外泌體電鏡成像

在掌握了外泌體的基礎知識后,我們還可以通過一些技巧來優(yōu)化電鏡成像的效果:優(yōu)化染色條件:染色的質量直接影響到圖像的對比度和分辨率??梢試L試不同的染色劑組合(如磷鎢酸、醋酸雙氧鈾)來獲取更高質量的圖像。調整電子束強度:電子束的強度過高可能會造成樣品的損傷,尤其是對較小的外泌體。適當降低電子束強度有助于提高成像穩(wěn)定性。

選擇合適的載體網格:載體網格材料和孔徑對成像質量也有影響。銅網和鎳網常見于TEM觀察中,可以根據樣品的特性選擇不同材質的網格。定量分析:通過圖像處理軟件(如ImageJ),可以對外泌體的大小、形態(tài)和數量進行精確的定量分析,從而提高研究的精確性和重復性。

外泌體電鏡圖片解讀的重要性

外泌體的研究潛力巨大,其在細胞間通訊、疾病診斷和治療等方面的應用前景廣泛。而電鏡成像提供的高分辨率圖像,是深入了解外泌體形態(tài)和功能的關鍵途徑之一。通過準確解讀電鏡圖片,研究者可以更好地理解外泌體的結構特征,為后續(xù)的功能研究提供基礎??偨Y來說,外泌體電鏡圖片的解讀不僅需要扎實的基礎知識,還需要不斷積累觀察經驗。通過結合成像技巧和圖像處理手段,研究者可以準確識別和分析外泌體,推動相關領域的科學研究進一步發(fā)展。

皮諾飛生物超微結構觀察:透射電鏡、掃描電鏡(量大有優(yōu)惠),周期為三周

技術服務

項目名稱

規(guī)格

價格(元)

透射電鏡

樹脂包埋(TEM)

200

半薄切片(TEM)

150

超薄切片(TEM)

200

負染(TEM)

500

甲苯胺藍染色(TEM

20

透射電鏡拍照(TEM)

400

透射電鏡全套(包埋制片拍照)

700

掃描電鏡

掃描電鏡全套

550

脫水樣本掃描

450

干燥樣本掃描

350

能譜

100

電鏡分析

電鏡分析

120

外泌體

外泌體電鏡檢測

450