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動物模型-潰瘍性結(jié)腸炎

一.疾病背景：

  潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC） 是一種病因不明，波及結(jié)腸與直腸的慢性、特發(fā)性炎性腸病。據(jù)世界胃腸病學(xué)組織描述，UC在30～70歲人群中發(fā)病率基本穩(wěn)定，性別間發(fā)病率也基本持平。但從整體人群而言，該病在世界范圍內(nèi)發(fā)病率正在不斷上升，在我國等新興工業(yè)化國家和地區(qū)這一表現(xiàn)更為顯著。所以，需要構(gòu)建合適的動物模型進行疾病的機制研究。

二.動物造模原理：

  葡聚糖硫酸鈉鹽（Dextran Sulfate Sodium Salt, DSS）是一種聚陰離子衍生物，DSS常被用于誘導(dǎo)結(jié)腸炎模型，其誘導(dǎo)機制雖尚未明確。目前的研究主要認為DSS增加腸道通透性、破壞腸黏膜屏障、上調(diào)某些細胞因子（腫瘤壞死因子、白介素、干擾素、IL-10和IL-12）、激活某些通路（NF-κB通路和TRPV1通路）或腸道菌群失調(diào)等有關(guān)。根據(jù)給藥時間、以及給藥周期可分為急性和慢性兩種結(jié)腸炎模型。

  對比多種UC建模類型，DSS造模具有很大優(yōu)勢:

1、癥狀與人類UC高度相似：可用于研究結(jié)腸炎發(fā)生機制和藥效研究;

2、成模率高：自由飲用DSS水溶液，簡單易行、重復(fù)性強;

3、可構(gòu)建多種結(jié)腸炎模型：急性結(jié)腸炎、慢性結(jié)腸炎，還可以聯(lián)合AOM構(gòu)建結(jié)腸炎相關(guān)性癌癥（CAC）模型;

4、適用于多種屬動物造模：小鼠、大鼠、斑馬魚、豬、果蠅等;

5、安全性高：DSS可被自然生態(tài)系統(tǒng)降解，對環(huán)境安全。

三.實驗材料與方法

 1.實驗動物

     SPF 級 C57BL/6J 6-8 周 齡 雄/雌 性 小 鼠 ，體重為 (29.65±5.35)g。

 2.造模方法

    ①慢性結(jié)腸炎造模：給予小鼠1%~3% DSS自由飲用數(shù)個星期即可。

②慢性結(jié)腸炎造模：急性造模一般采用較高濃度的DSS建立，給藥時間較短。如給予倉鼠3%~5% DSS自由飲用一周即可。

 3.急性DSS結(jié)腸炎模型具體過程：Day1：稱重并標(biāo)記各組C57BL/6小鼠。待造模小鼠飲用3-5% DSS水溶液，未處 理組小鼠飲用正常水。

Day3：給予待造模小鼠更換新鮮3-5%DSS飲用水。

Day5：給予待造模小鼠更換新鮮3-5%DSS飲用水。

Day8：給予待造模小鼠更換新鮮不含DSS的飲用水。

數(shù)據(jù)記錄：每隔24h記錄小鼠體重、糞便粘稠度、糞便潛血等指標(biāo)。

四．實驗結(jié)果：

1.組織學(xué)評估

組織學(xué)分析的標(biāo)準(zhǔn)方法為HE染色，待測樣本經(jīng)4%多聚甲醛固定，固定狀態(tài)良好后，嚴格按照本單位病理實驗檢測SOP程序進行修剪、脫水、包埋、切片、染色、封片,最后鏡檢合格的樣片進行掃描拍照。

動物個體主要變化：腹瀉、黏液樣便、糞便潛血、肉眼血便、重量減輕、活動度減少，毛色變差等。

HE染色的主要病理變化：

急性結(jié)腸炎模型表現(xiàn)：黏膜水腫、杯狀細胞缺失、隱窩腫脹破壞，上皮細胞損傷，黏膜和黏膜下層出現(xiàn)不同程度的炎癥細胞浸潤。

慢性結(jié)腸炎模型表現(xiàn)：黏膜增厚、淋巴結(jié)腫大，杯狀細胞缺失、隱窩缺失，甚至出現(xiàn)腫瘤樣變。

結(jié)腸組織免疫熒光染色

 結(jié)腸組織CD4染色

 結(jié)腸組織MUC2染色

結(jié)腸組織ZO-1染色

結(jié)腸組織免疫組化染色

結(jié)腸組織TNF-α染色

結(jié)腸組織IL-6染色

統(tǒng)計分析

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