DAPI為4',6二脒基-2-苯吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole),是一種能夠與DNA強力結(jié)合的熒光染料,常用于熒光顯微鏡觀測。因為DAPI可以透過完整的細胞膜,因此可以用于細胞的染色。
主要用于組織或細胞中細胞核的染色。
DAPI能與雙鏈DNA小槽,特別是AT堿基結(jié)合,也可以插入少于3個連續(xù)AT堿基對的DNA序列中。當它與雙鏈DNA結(jié)合時,熒光強度增強20倍,而與單鏈DNA結(jié)合則無熒光增強現(xiàn)象,因此是一種簡易、快速和敏感的檢測DNA的方法。當DAPI與雙鏈DNA結(jié)合時,在熒光顯微鏡下觀察,DAPI染劑在358nm(紫外線)處有一個最大吸收峰,并在461nm(藍)處有一個最大發(fā)射峰,其發(fā)射光的波長范圍涵蓋了藍色至青綠色,因此在熒光顯微技術(shù)中,DAPI被紫外線照亮且被藍或青色濾鏡檢出。
石蠟切片脫蠟至水-DAPI染色-TBST洗滌-封片-顯微鏡鏡檢。
1、提供固定合格的樣本。組織離體后,選擇合適的固定液立即固定,固定液的量建議大于組織體積的10-15倍,新鮮標本用合適的容器固定24-48h,大標本固定12h,再切開固定。標本常溫(24℃左右)或冷藏(4℃)固定,切勿冷凍結(jié)冰,固定樣本常溫運輸送樣。
2、涂片和爬片必須充分固定,石蠟切片實驗前需充分脫蠟。