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實(shí)驗(yàn)介紹 :
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光染料或熒光探針,利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR反應(yīng)進(jìn)程,zui后通過(guò)內(nèi)參對(duì)照計(jì)算目的基因表達(dá)差異分析或通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析,具有操作簡(jiǎn)便、快速高效、高通量、高敏感性等特點(diǎn)
實(shí)驗(yàn)流程:
取材-RNA提取逆轉(zhuǎn)錄成cDNA- QPCR擴(kuò)增-數(shù)據(jù)分析-發(fā)報(bào)告
結(jié)果展示:
擴(kuò)增曲線
熔解曲線
送樣運(yùn)輸要求:
1)動(dòng)物組織:100 mg(黃豆大小),zui少50 mg(綠豆大小),脂肪組織,結(jié)締組織,纖維化組織適當(dāng)增加,干冰運(yùn)輸。
2)細(xì)胞:1×10個(gè)細(xì)胞。細(xì)胞沉淀或加入trizol的細(xì)胞樣本(不要直接運(yùn)輸加trizol的細(xì)胞培養(yǎng)皿),干冰運(yùn)輸。
3)全血:zui少1mL新鮮血液EDTA抗凝管,-20°℃運(yùn)輸。
4)植物:新鮮的葉、果肉、種子等zui少需100mg,干冰運(yùn)輸。
5)cDNA和基因組DNA,干冰運(yùn)輸。