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實(shí)驗(yàn)介紹 :
絕 對定量是通過樣品的Cq值和標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較實(shí)現(xiàn)的。首先為了建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,需要已知拷貝數(shù)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,對標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行5次以上的連續(xù)梯度稀釋,將稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增,根據(jù)各樣品的拷貝數(shù)濃度及相應(yīng)的Cq值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到線性方程Cq= -klgX0+b,其中X0為起始模板量。然后將未知樣本的Cq值與此標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較,確定其拷貝數(shù)濃度。
實(shí)驗(yàn)流程:
取材-DNA提取- 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品-QPCR擴(kuò)增-數(shù)據(jù)分析-發(fā)報告
結(jié)果展示:
送樣運(yùn)輸要求:
1)動物組織:100 mg(黃豆大小),最少50 mg(綠豆大小),脂肪組織,結(jié)締組織,纖維化組織適當(dāng)增加,干冰運(yùn)輸。
2)細(xì)胞:1×10個細(xì)胞。細(xì)胞沉淀或加入trizol的細(xì)胞樣本(不要直接運(yùn)輸加trizol的細(xì)胞培養(yǎng)皿),干冰運(yùn)輸。
3)全血:最少1mL新鮮血液EDTA抗凝管,-20°℃運(yùn)輸。
4)植物:新鮮的葉、果肉、種子等最少需100mg,干冰運(yùn)輸。
5)質(zhì)粒和基因組DNA,干冰運(yùn)輸。