實驗介紹:
酶聯(lián)免疫(ELISA),利用抗原與抗體的特異性反應將待測物與酶連接,然后TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。根據(jù)顏色反應定量目標抗原或抗體含量。該技術(shù)可用于檢測大分子抗原和特異性抗體等,具有快速、靈敏、簡便、載體易于標準化等優(yōu)點
實驗流程:
組織/細胞研磨取上清 → 加樣→ 溫育→ 加抗體→ 溫育→ 洗板→ 加酶結(jié)合物→ 溫育→ 洗板→ 加顯色底物→ 終止反應→ 結(jié)果測定
送樣運輸要求:
1)、動植物組織樣本(干冰運輸)
準確稱取動物組織重量按重量(mg):體積(ul)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(推薦0.86%或0.9%的生理鹽水),冰水浴條件下,機械勻漿,制備成10%的勻漿液,2500~3000轉(zhuǎn)/分鐘,離心10分鐘,取上清液進行測定。
2)、血清樣本(干冰運輸)
全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜(GLU檢測請勿全血樣本放置過夜取血清)后于2-8℃ 3000轉(zhuǎn)/分離心15min,取上清即可立即檢測;或進行分裝,并將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。解凍后的樣本應再次離心,然后檢測。
3)、血漿樣本(干冰運輸)
可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃3000轉(zhuǎn)/分離心15min,取上清即可立即檢測;或進行分裝,并將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。解凍后的樣本應再次離心,然后檢測。
4)、細胞樣本
貼壁細胞:將細胞用PBS沖洗2次后,用細胞刮將細胞小心刮下來,將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分,離心10min。棄上清留細胞沉淀,干冰運輸。
懸浮細胞:將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分,離心10min。棄上清留細胞沉淀,干冰運輸。
細胞上清:標本于2-8℃,3000轉(zhuǎn)/分離心15min取上清,上清立即用于實驗,或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復凍融。
實驗結(jié)果展示: