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實(shí)驗(yàn)介紹:
酶聯(lián)免疫(ELISA),利用抗原與抗體的特異性反應(yīng)將待測物與酶連接,然后TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。根據(jù)顏色反應(yīng)定量目標(biāo)抗原或抗體含量。該技術(shù)可用于檢測大分子抗原和特異性抗體等,具有快速、靈敏、簡便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)
實(shí)驗(yàn)流程:
組織/細(xì)胞研磨取上清 → 加樣→ 溫育→ 加抗體→ 溫育→ 洗板→ 加酶結(jié)合物→ 溫育→ 洗板→ 加顯色底物→ 終止反應(yīng)→ 結(jié)果測定
送樣運(yùn)輸要求:
1)、動植物組織樣本(干冰運(yùn)輸)
準(zhǔn)確稱取動物組織重量按重量(mg):體積(ul)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(推薦0.86%或0.9%的生理鹽水),冰水浴條件下,機(jī)械勻漿,制備成10%的勻漿液,2500~3000轉(zhuǎn)/分鐘,離心10分鐘,取上清液進(jìn)行測定。
2)、血清樣本(干冰運(yùn)輸)
全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜(GLU檢測請勿全血樣本放置過夜取血清)后于2-8℃ 3000轉(zhuǎn)/分離心15min,取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝,并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心,然后檢測。
3)、血漿樣本(干冰運(yùn)輸)
可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃3000轉(zhuǎn)/分離心15min,取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝,并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心,然后檢測。
4)、細(xì)胞樣本
貼壁細(xì)胞:將細(xì)胞用PBS沖洗2次后,用細(xì)胞刮將細(xì)胞小心刮下來,將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分,離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀,干冰運(yùn)輸。
懸浮細(xì)胞:將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分,離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀,干冰運(yùn)輸。
細(xì)胞上清:標(biāo)本于2-8℃,3000轉(zhuǎn)/分離心15min取上清,上清立即用于實(shí)驗(yàn),或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復(fù)凍融。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示: