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實(shí)驗(yàn)介紹:
TUNEL技術(shù)可對(duì)組織或細(xì)胞中凋亡小體或單個(gè)凋亡細(xì)胞進(jìn)行染色,能準(zhǔn)確反映細(xì)胞凋亡典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征。凋亡細(xì)胞內(nèi)內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被激活而將自身染色體DNA切斷成缺口或3-OH末端片段這一特點(diǎn),利用脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶將標(biāo)有標(biāo)記物(如地高辛,生物素或熒光素)的脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移到3-OH末端,再用免疫組化法或免疫熒光檢測(cè)凋亡細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)流程:
白光: 切片脫蠟至水--蛋白酶K修復(fù)--孵育tunel反應(yīng)液--孵育Streptavidin-HRP反應(yīng)液-- DAB顯色--蘇木素染核--脫水封片--鏡檢拍照
熒光:脫蠟至水--蛋白酶K修復(fù)--破膜通透--孵育tunel反應(yīng)液--DAPI染核--抗熒光素淬滅劑封片-- 鏡檢拍照
注意事項(xiàng):
(1)石蠟切片:組織取樣后應(yīng)立即置于固定液中,常溫運(yùn)輸切勿冷凍結(jié)冰;
(2)冰凍切片:-20度運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示:
Tunel 綠 Tunel 綠
Tunel 白光 Tunel 白光