冰凍切片是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度,然后進行切片的方法。因其制作過程較石蠟切片快捷、簡便,且不經(jīng)過酒精、二甲苯等有機溶劑及高溫環(huán)境,可較好的保存脂類、酶類等易于溶解有機溶劑的物質。也可更好地滿足切片厚度的要求。新鮮組織取材并OCT包埋/固定組織經(jīng)過15%-30%梯度蔗糖溶液脫水后取材并OCT包埋,然后按指定要求切片。低溫存放完成的切片。速凍是冰凍切片最為關鍵的環(huán)境,只有速凍才能減少組織內(nèi)的冰晶。
在滿足客戶要求的前提下,根據(jù)不同的組織類別和后續(xù)需要做的實驗項目選擇合適的厚度。
新鮮組織:取材-OCT包埋-切片。
固定組織:取材-固定-蔗糖脫水-OCT包埋-切片。
1、新鮮組織需干冰保存運輸,固定組織用固定液保存常溫運輸,如有自發(fā)光應避光運輸。
2、特殊結構或部位,送樣時應附圖譜或說明,確保能快速準確地切到該區(qū)域。
3、標本瓶上編號清楚,簡潔明了。需使用合適的容器存放組織,容器不宜過小,否則會導致組織擠壓變形。不能用玻璃瓶,易碎。不能漏液,否則會導致編號模糊等情況。
1、切片后常規(guī)的HE、IHC、IF染色等。
2、某些酶的顯示,如ATP酶、β-半乳糖苷酶等。
3、組織中的脂肪和脂類物質,常見于某些病例如脂肪瘤、脂肪肝等。切片后,經(jīng)過油紅O染色輔助判斷。
4、神經(jīng)病理學技術中,要求一定厚度的腦組織切片等。
5、對某些物質所進行的免疫熒光的研究,比如新鮮組織自發(fā)熒光,切片后觀察。
新鮮組織切忌反復凍融,易形成冰晶空洞,取材時盡量用濾紙吸干表面水分再進行-20℃或者-80℃保存。