實驗介紹:
TUNEL技術(shù)可對組織或細胞中凋亡小體或單個凋亡細胞進行染色,能準確反映細胞凋亡典型的生物化學和形態(tài)特征。凋亡細胞內(nèi)內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被激活而將自身染色體DNA切斷成缺口或3-OH末端片段這一特點,利用脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶將標有標記物(如地高辛,生物素或熒光素)的脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移到3-OH末端,再用免疫組化法或免疫熒光檢測凋亡細胞
實驗流程:
白光: 切片脫蠟至水--蛋白酶K修復--孵育tunel反應(yīng)液--孵育Streptavidin-HRP反應(yīng)液-- DAB顯色--蘇木素染核--脫水封片--鏡檢拍照
熒光:脫蠟至水--蛋白酶K修復--破膜通透--孵育tunel反應(yīng)液--DAPI染核--抗熒光素淬滅劑封片-- 鏡檢拍照
注意事項:
(1)石蠟切片:組織取樣后應(yīng)立即置于固定液中,常溫運輸切勿冷凍結(jié)冰;
(2)冰凍切片:-20度運輸
實驗結(jié)果展示:
Tunel 綠 Tunel 綠
Tunel 白光 Tunel 白光